Пущинский государственный университет

магистратура      |      аспирантура      |      повышение квалификации

Соглашение № 14.B37.21.1971 от 14.11.2012 г. (мероприятие 1.5)

Тема:
«Анализ эпитопов ответственных за токсичность энтеротоксина А стафилококков с помощью моноклональных антител к нему»

Цель:
Целью проекта является поиск участков - эпитопов молекулы энтеротоксина А стафилококков, взаимодействие с которыми антител приводит к инактивации токсического действия. Задачами проекта является:
  • поиск антител, обладающих токсин-нейтрализующими свойствами
  • установление структуры эпитопов, с которыми взаимодействуют нейтрализующие антитела и определение их локализации в молекуле токсина
  • построение методами биоинформатики модели пространственной организации функционально важных эпитопов в энтеротоксине А стафилококков.
Для решения данных задач необходимо разработать или адаптировать животные модели анализа токсичности энтеротоксина А стафилококков. В качестве животных моделей предполагается использовать мышей. Выбор животных обусловлен данными литературы, возможностями питомника лабораторных животных и ценой вопроса.

Основные результаты первого этапа проекта:
  1. Разработана схема очистки энтеротоксина А, анализ чистоты продукта проводили электрофорезом в ПААГе в присутствии додецилсульфата натрия и иммунохимической активности по взаимодействию с антителами против энтеротоксина А. Получен высокоочищенный препарат токсина, пригодный для дальнейших функциональных исследований – определению его активности на мышиных моделях. Необходимо отметить, что разработанная схема выделения является оригинальной
  2. С целью отработки технологии определения токсичности энтеротоксина А стафилококков на мышиной модели была проведен анализ влияния премирующих агентов и оптимальной линий животных
  3. Были исследованы токсические свойства SEA на мышах линий BALB/c и C57BL/6, полученные из питомника лабораторных животных ФИБХ РАН. На этих моделях оценивали дозо-зависимую токсичность и влияние на нее премирующих реагентов. В качестве премирующих реагентов были выбраны галактозамин (GalN) и липополисахарид E coli (ЛПС). Проведенные исследования показали, что минимальной токсической дозой была при использовании мышей линии C57BL/6 и 150 мкг ЛПС, в качестве премирующего реагента.


Вклад приглашенного руководителя в проект:
При написании проекта и выполнении данного этапа оказался неоценимым опыт приглашенного исполнителя – Адамейко Игоря Игоревича. Игорь Игоревич специалист в области биологии развития, работы с животными моделями, имеет хорошие знания в области молекулярного клонирования. Знание ньюансов работы позволили нам быстро и главное успешно подобрать и апробировать животную модель для оценки токсического действия энтеротоксина А стафилококков.
*

 
© Пущинский государственный естественно-научный институт, 2004-2014.
Разработка и техническая поддержка © Специализированный центр новых информационных технологий
eldis