Пущинский государственный университет

магистратура      |      аспирантура      |      повышение квалификации

Государственный контракт № 02.740.11.5143 от 09.03.2010 г. (мероприятие 1.5)


Тема:
«Изучение роли опиатной системы в патогенезе инфаркта миокарда»

Цель:
Разработка биомоделей и оценка их адекватности. Выбор фармакологических молекул, изучение их эффективности и оценка перспективности их практического применения

Основные результаты проекта:
  • Разработана биомодель инфаркта миокарда на крысах CD.
    Модель инфаркта миокарда: Продольным разрезом кожи левее мечевидного хряща, параллельно ему, вырезают мышцы по их направлению, добираются до 3-4 межреберья. Пинцетом захватывают и приподнимают третье ребро и делают разрез мышц в межреберье третьего и четвертого ребра. Разрезают мышцы ближе к грудине, взявшись пинцетом за третье ребро, вырезают его. Пинцетом разрушают перикард. После разрыва перикарда, выталкивают сердца из грудной клетки. После выталкивания сердца, наносят иглу с лигатурой на левую нисходящую коронарную артерию ниже на 3 мм ушка левого предсердия и отпускают сердце с лигатурой чтобы оно быстро оказалось в грудной клетке. Далее подсоединяют оклюдер, для окклюзии сосуда затягивают окклюдер и фиксируют его зажимом, следя при этом за сигналом ЭКГ. Как только он изменяется, регистрируют время начала окклюзии. При остром инфаркте на ЭКГ наблюдалось куполообразное поднятие сегмента ST, уменьшение зубца R или его замена комплексом QS.. Также явным признаком наступления окклюзии является цианоз передней стенки левого желудочка.



    По завершению окклюзии проводили окрашивание сердца для выявления зоны инфаркта и подсчета площади поражения. Для этого снимается окклюдер и завязывается лигатура на коронарной артерии, затем вводится внутривенно 2%-метиленовый синий (объем введения составляет 6 мл/кг), сердце быстро вырезается и промывается в воде. Далее от сердца отрезается правый желудочек и предсердия, оставшийся левый желудочек режется на 2х-милиметровые срезы, которые окрашиваются 1% раствором 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида и ставятся инкубироваться в буфере с pH 7.4 при температуре 37°C . После 15-минутного периода инкубации срезы погружались в 10% раствор формалина на 5 минут. Каждый срез сканируется, изображение переводится в цифровую форму. Для оценки и подсчета площадей зоны инфаркта (не окрашивается 2,3,5-трифенилтетразолия хлоридом) и зоны риска (окрашивается 2,3,5-трифенилтетразолия хлоридом) все срезы обрабатываются далее в графическом редакторе (программа ImageTool). Высчитывали отношение зоны инфаркта к зоне риска (IS/AAR, %) по каждому срезу и рассчитывали среднее значение для животного.



  • Выбор фармакологических молекул, изучение их эффективности и оценка перспективности их практического применения
    Изучались свойства пяти новых аналогов энкефалинов с кодовыми названиями ЕР91, ЕР94 и общей тетрапептидной последовательностью Tyr-R-Gly-Phe(NO2)-NH2 (где R-основной аминокислотный остаток). Пептиды были синтезированы в лаборатории пептидного синтеза Eribis Pharmaceuticals AB (Uppsala, Sweden) стандартной методикой твердофазного синтеза пептидов с использованием Fmoc схемы (патент Бобровой). Было обнаружено, уменьшение размера зоны инфаркта до 30% и менее в группах, которым вводили пептиды ЕР91 и ЕР94, являлось дозозависимым с пределом эффективных доз 0,14-3,5 мкг/кг и 0,5-5 мкг/кг, наибольшей эффект наблюдался в дозах 3,4 мкг/кг и 1,1 мкг/кг соответственно. Пептид ЕР94 в дозе 1 мкг/кг оказывает кардиопротективный эффект в виде значительного уменьшения размера инфаркта на модели острого ишемии/реперфузии миокарда у крыс CD при введении его до окклюзии ЛКА







    Жизнеспособный миокард окрашен в темно-синий цвет. В зоне риска соли тетразолия реагируют с кофактором NADH+ и ферментом дегидрогеназой, окрашивая ее в кирпично-красный цвет. Мертвые клетки теряют этот фермент и кофактор в связи с разрушением мембраны, и поэтому ткань в зоне инфаркта не дает положительной реакции и остается бледно-окрашенной.


  • Заключение:
    Два новых синтетических аналогов экефалина ЕР94 и ЕР91 показали высокую кардиопротективную активность при однократном введении до окклюзии ЛКА. Причем пептид ЕР94 уже в дозе 1 мкг/кг обладал активностью, поэтому и был выбран нами для дальнейшего изучения его кардиопротекивных свойств.
*

 
© Пущинский государственный естественно-научный институт, 2004-2014.
Разработка и техническая поддержка © Специализированный центр новых информационных технологий
eldis